Daleo, Maris J. & Matthew C. Allender (2025): Developing and validating a multiplex hydrolysis probe-based quantitative PCR assay for the detection of four pathogens in chelonians. – Journal of Virological Methods 332: 115077.
Die Entwicklung und Validierung eines Multiplex-Hydrolyseproben-basierten, quantitativen PCR-Assays zum Nachweis von vier Krankheitserregern bei Schildkröten.
DOI: 10.1016/j.jviromet.2024.115077 ➚
Terrapene carolina,
© Hans-Jürgen Bidmon
Viele Bemühungen zum Schutz von Wildtieren konzentrieren sich auf die Auswirkungen eines einzigen Krankheitserregers, aber damit viele Schutzbemühungen erfolgreich sind, müssen Forscher ein Verständnis für ökologische Prozesse entwickeln, die mehrere gleichzeitig auftretende Krankheitserreger umfassen können. Wir haben einen Multiplex-quantitativen PCR-Test (qPCR) entwickelt, um vier Krankheitserreger bei der Östlichen Dosenschildkröte (Terrapene carolina carolina) nachzuweisen, darunter das Frog Virus 3 (FV3), das Terrapene Herpesvirus 1 (TerHV1), das Dosenschildkröten-Mycoplasma sp. (BTMyco) und das Terrapene Adenovirus (TerAdv). TaqManTM-Primersonden wurden unter Verwendung zuvor veröffentlichter Assays mit vier verschiedenen Fluorophoren entwickelt. Multiplex-Cq-Werte, die gegen Singleplex-Cq-Werte aufgetragen wurden, zeigten Steigungen von 0,967, 1,00, 0,980 und 0,973 für TerHV1, TerAdv, FV3 und BTMyco und R2-Werte von 0,999 für alle vier Pathogene. Der Test war in hohem Maße konsistent mit der Intra-Assay-Variation aller vier Zielpathoge, die über alle Konzentrationen hinweg zwischen 0,05 und 1,826 % lag, während die Inter-Assay-Variation zwischen 0,031 und 4,569 % bei allen vier Zielpathogenen und allen Konzentrationen lag. Klinische Proben wurden anhand von zuvor entnommenen Proben von Östlichen Dosenschildkröten und Rotwangen-Schmuckschildkröten (Trachemys scripta elegans) getestet und zeigten ein ähnliches Verhalten wie Singleplex-Assays. Dieser Multiplex-Assay ist ein effektives, zeitsparendes Diagnosewerkzeug zur schnellen Überwachung von Schildkrötenpathogenen durch den Nachweis von FV3, TerHV1, BTMyco und TerAdv in einer einzigen Reaktion. Ein validierter und klinisch verwendeter Multiplex-Assay wird bei der Charakterisierung eines komplexeren Pathogenprofils für zukünftige epidemiologische Studien an Schildkröten von Vorteil sein, um die Dynamik von Pathogenen und ihre Auswirkungen auf die Gesundheit von Individuen und Populationen besser zu beschreiben.
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Terrapene carolina – Carolina-Dosenschildkröte